在基质上负载特定的功能配基,才能与目标物进行特异性吸附作 用。常用扩张床基质的骨架材料为碳水化合物,含有丰富的羟基,具有特异性的功能配 基通过与羟基作用,负载到基质上,完成对羟基的修饰和改造。由于羟基的化学活性较 弱,故应先将其活化。羟基活化剂一般为含有双键和环氧基的双官能团化合物,如烯丙基溴、环氧氯丙烷、二乙烯基砜等,羟基的活化反应过程所示。 经活化的基质可较容易地与功能配基发生偶联,从而制备出性能各异的功能化介质通过反相悬浮发制备得到的基质一般不具有特异性吸附位点,故不可直接作为扩张 床介质使用,而是需要。
传统的扩张床介质主要有亲和介质、离子交换介质等。近年来,学者们又开发出多 种模式的介质,如疏水性电荷诱导层析介质、混合模式介质等等。
疏水性电荷诱导层析介质是一种新型的扩张床介质,它结合了亲和作用、静电相互作用、 疏水相互作用、偶极相互作用等多种分子间的作用力,特别适合于抗体分离。功能 配基可通过亲和作用及疏水作用与抗体保守区域中的Fc片段特异性结合,当溶液的pH 下降时,静电作用会使抗体从功能配基上解离出来,其机理所示。由于HCIC 配基和抗体中Fc片段的亲和作用,故可通过基因重组的方式来设计出含有Fc片段的融 合蛋白,从而简化蛋白分离步骤,提高分离效率。
混合模式层析介质的功能配基多含有疏水性基团(如烷基、苯环等)和亲水性基团 (如羧基、氨基等),在不同条件下可以不同方式作用于目标分子,其机理 所示。当离子强度较低时,蛋白质会通过离子交换作用吸附在功能配基的亲水性基团周 围;当离子强度较高时,蛋白质外层电荷会被盐离子屏蔽,使蛋白质表现出明显的疏水 性,从而与功能配基的疏水性基团结合。混合模式介质的配基不仅受离子强度影响,还 受pH影响,因此可以调节的参数较离子交换介质的多,使用起来灵活性大,特别适用于 从复杂料液中分离出目标产物。
各种新型作用模式介质的产生,使扩张床在生物质分离中的应用更加广泛。隨着人 们对于分子间作用力不断深入的了解,更多不同作用模式的介质将会被设计和开发出来, 这对提高扩张床的分离效率有着重要的意义。